感受态细胞（感受态细胞概念）

2024-03-28 18:05:08次浏览条评论

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1、将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上， 37℃恒温培养箱培养12-16h，挑取单个菌落，接种至10 mLLB普通肉汤中，37空气摇床震荡培养过夜。

2、细胞生长状态和密度：不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从－70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来控制。

3、这要看你的接种量的多少，还有菌种活力大小；一般来说如果挑单克隆要16~20h，当看到培养基变浑浊，可凭经验观察浑浊度。

感受态细胞（感受态细胞概念）

1、感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温0℃时处理快速生长的细菌，从而获得感受态细菌。感受态细胞的特点理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。

2、将培养液转入离心管中，冰上放置10分钟，然后于4℃下3000g离心10分钟。弃去上清，用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30分钟后，4℃下3000g离心10分钟。

3、细菌转化的方法多以Mendel和Higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。

4、弃上清，用事先冰浴的0.1mol/Lcacl2重新悬浮细胞，冰浴30min。收集菌体，条件同上。弃上清，在冰浴条件下加入0.1mol/Lcacl2溶液。分装保存（40%甘油与感受态细胞1：1混合，使甘油的终浓度为20%）。

1、．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的 DNA。7．一定范围内，转化效率与外源 DNA 的浓度呈正比。

2、（1）质粒DNA的质量和浓度：用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的，转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。

3、培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了 Inoue 的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一个非常理想方法。

4、感受态，指的是细菌在一定的条件下可以吸收外部环境中的DNA的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。

1、那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。

2、原核细胞（比如细菌）本身更易吸收外界DNA（限制性核酸内切酶最早就是从原核细胞中提取的）。用钙离子处理后，会进一步增大外源DNA进入原核细胞的机会（这就是所谓的感受态细胞）。

3、细胞处于容易吸收外源DNA的状态，即感受态。（裸露的外源DNA分子直接进入细胞体内称为转化。进行转化时候要求细胞处于容易吸收外源DNA的状态，即感受态，重组分子才能进入细胞内。

4、感受态细胞指的是经处理后，处于能吸收周围环境中DNA分子生理状态的微生物细胞，在转基因技术操作过程中要将重组DNA分子导入微生物受体细胞时就需要用感受态细胞。

5、一般是指容易进行DNA转染的大肠杆菌细胞。

1、转化：转化指同源、异源的“裸露”的DNA分子被感受态细胞摄取并实现基因水平转移的过程。是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段。

2、这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。

3、转化子是指：经转化后出现了供体性状的受体细胞称为转化子。即是转化成功的菌落。

4、转化是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。

5、感受态细胞转化原理：主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。

使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。

感受态细胞的概念感受态，指的是细菌在一定的条件下可以吸收外部环境中的DNA的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。

原核细胞（比如细菌）本身更易吸收外界DNA（限制性核酸内切酶最早就是从原核细胞中提取的）。用钙离子处理后，会进一步增大外源DNA进入原核细胞的机会（这就是所谓的感受态细胞）。

细胞处于能够吸收DNA的状态称感受态，处于感受态的细胞称作感受态细胞。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。

感受态细胞指的是经处理后，处于能吸收周围环境中DNA分子生理状态的微生物细胞，在转基因技术操作过程中要将重组DNA分子导入微生物受体细胞时就需要用感受态细胞。

感受态细胞是指容易吸收质量的细菌，通常是某种大肠杆菌。