薄层色谱法的操作步骤及注意事项（薄层色谱实验步骤）

薄层色谱实验步骤如下：1、将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2至0.3毫米）。2、取下涂好薄层的玻璃板，置水平台...，以下是对"薄层色谱法的操作步骤及注意事项"的详细解答!

文章目录

• 1、薄层色谱实验步骤
• 2、薄层色谱法操作流程
• 3、薄层色谱中制备薄层板要注意什么
• 4、薄层色谱操作步骤有哪些

薄层色谱实验步骤

薄层色谱实验步骤如下：1、将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2至0.3毫米）。2、取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110摄氏度烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。3、用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0厘米，点样直径为2到4毫米，点间距离约为1.5到2.0毫米，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。4、将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5到1.0厘米（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10到15厘米）。5、取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。

薄层色谱法操作流程

薄层色谱法是一种常用的分离和分析技术。其操作流程包括：样品制备、色谱板准备、样品施加、色谱板开发、检测和数据分析。首先，样品制备阶段是将待分析的混合物溶解或悬浮于适当的溶剂中，并通过过滤或离心等方法去除杂质。接下来，需要准备色谱板，这包括选择合适的基质和选择性的涂层材料。在样品施加阶段，使用微量注射器将样品施加在色谱板的起点上，通常通过点斑法或线斑法进行。然后，色谱板被放置在封闭的容器中，以便让溶剂上升并分离样品。在色谱板开发阶段，容器中的溶剂会通过毛细作用上升到色谱板上。不同的化合物由于其与涂层材料的亲疏性不同，会在色谱板上上升的速度不同，从而实现分离。一旦样品达到所需的上升距离，色谱板被取出并干燥。接下来是检测和数据分析阶段，可以使用紫外可见光谱法、荧光法、显色剂等方法对分离后的化合物进行定性和定量分析。最后，根据测定结果进行数据分析和结果的解释。

薄层色谱中制备薄层板要注意什么

　　①含煅石膏作粘合剂的吸附剂在加水或含CMC 的水溶液调匀后，在2 分钟内铺板''以免粘合剂 固化而使铺板固难。

　　②铺板时防止板面有气泡的方法是调匀吸附剂时玻棒顺一个方向搅动，再者在调匀时滴加少许 乙醇。

　　③铺板时不同吸附剂一般情况下，与溶液之比例为1:3''活化110℃30 分钟。

　　④关于活化问题，活化就是将吸附剂水分加热去掉的过程，其目的就是增加吸附剂的吸附能力， 增加活度。

　　⑤关于活度问题：薄层活化是将吸附剂中水解吸附的过程，但吸附剂与水的结合（氢键）是可 逆的。判定吸附能力大小的标志是活度，活度一般分五级，测定过程是将几种染料的配成混合液， 在一定条件下展开，检查其分离度大小来判别的。在实际工作中一般不测定活度，但在上述规定活 化的条件制备薄层板的活度一般在Ⅱ－Ⅲ级，注意的是活化好与薄层板应在硅胶干燥剂环境下保存备用。

薄层色谱操作步骤有哪些

先制备薄层板，即在大小适当的玻璃板上，均匀涂上吸附剂，厚度在一毫米以内，然后在距底边1。5厘米处点上样品溶液，形成一个小点，称为“原点”。再将薄层板置于盛有动相溶剂的玻缸内（此溶剂称为“展开溶剂”，玻缸称为“展开槽”）。

当溶剂沿薄层扩散到距原点以上一定距离时，取出薄层板，记录展开溶剂扩展前沿距原点的距离A。用喷洒显色试剂或紫外光线照射的方法使被分离的化合物显色，此过程称为“显谱”。观察并记录所显斑点的中心距原点的距离。斑点在薄层板上的位置通常用比移值（Rf）表示。

基本原理：

薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。